黃曲霉毒素免疫親和柱

GB5009.22-2016《食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》GB5009.24-2016《食品中黃曲霉毒素M族的測定》滿足新國標檢出限，更嚴格質量標準

詳情:

黃曲霉毒素是一種毒性極強的有毒物質，其危害性在于對人及動物內臟組織有破壞作用。黃曲霉毒素免疫親和柱以 抗原-抗體特異性反應為基礎，將抗體鍵合在凝膠上，使其與黃曲霉毒素特異性結合，從而實現分離凈化的效果。

相關標準：

GB5009.22-2016《食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》

GB5009.24-2016《食品中黃曲霉毒素M族的測定》滿足新國標檢出限，更嚴格質量標準

應用實例:

添加水平為0.25 ug/kg 大米中黃曲霉毒素總量的液相色譜圖

注意事項：

1、黃曲霉毒素對人體有害，應戴手套操作。

2、使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液用5%濃度的NaClO溶液浸泡過夜。

3、不要使用過了有效日期的免疫親和柱。

4、免疫親和柱不使用時要2-8℃保存，不可凍存。

5、使用前，免疫親和柱需回至室溫（22-25℃）。

6、取樣量：根據實際情況可以適當增減，但不可太少，同時提取液體積要按比例隨之改變。

7、pH：上柱液pH要在6~8之間，若偏離此范圍需要HCl或NaOH調節pH。

需要的材料但盒中不提供：

試劑配制：

1、提取液：80%CH3OH移取800mLCH3OH，加一級水200mL混合。

2、PBA溶液：稱取8.00gNaCl，1.20g Na2HPO4，0.20g KH2PO4，0.20gkcl，用900mL蒸餾水溶解，然后用HCl調節pH值至7.4，后用蒸餾水稀釋定容至1000mL。

樣品處理：真菌毒素分析的誤差來源是樣品的收集和取樣過程，所以要保證樣品收集和取樣的代表性。

（一）一般固體樣品（稀釋倍數：2倍）

1、稱取5g試樣（精確到0.01g）于50ml離心管中；

2、加20.0mL提取液，渦旋混勻，置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20min（或高速均質3min）；

3、在5000r/min下離心10min（或均質后用玻璃纖維濾紙過濾至澄清）；

4、取濾液4ml，加入24ml PBS溶液，混勻（如混濁，請用玻璃纖維濾紙過濾至澄清）

（二）植物油脂（稀釋倍數：2倍）

1、稱取5g試樣（精確到0.01g）于50ml離心管中；

2、加20.0mL提取液，渦旋混勻，置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20min（或高速均質3min）；

3、5000r/min離心10min，取上清液備用；

4、取濾液4ml，加入24ml PBS溶液，混勻，（如混濁，請用玻璃纖維濾紙過濾至澄清）

（三）醬油、食醋（稀釋倍數：2倍）

1、稱取5g試樣（精確到0.01g）于50ml離心管中；

2、用提取液定容至25ml（精確至0.1mL），渦旋混勻，置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20min（或高速均質3min）

3、在5000r/min下離心10min（或均質后用玻璃纖維濾紙過濾至澄清）；

4、取濾液4ml，加入，加入24ml PBS溶液，混勻，（如混濁，請用玻璃纖維濾紙過濾至澄清）

操作程序：符合國標GB 5009.22-2016

1、連接:將免疫親和柱后蓋取下，用剪刀剪開，重新蓋上，連接于泵流操作架的30mL注射器下；

2、上樣:移取上述提取液移至注射器內，打開下端堵頭；

3、富集:將空氣壓力泵與注射器連接，調節壓力使樣品提取液緩慢通過免疫親和柱，建議重力過柱；

4、洗滌:用20mL蒸餾水分兩次加壓清洗，棄去全部流出液，并使2-3mL空氣通過柱體；

5、洗脫:為保證洗脫充分，以2.0mL色譜級CH3OH進行洗脫，重力洗脫即可。首先，將免疫親和柱內液體排干，加1.0mLCH3OH于柱管內，重力過柱，當溶劑通過柱子后；再加入1.0mLCH3OH重復上述洗脫步驟，后輕微加壓排凈洗脫液，合并洗脫液，將洗脫液濃縮吹干，用1mL流動相復溶，渦旋30s溶解殘余物，0.22μm濾膜過濾，待測。

操作流程圖示

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