Amplite 熒光法髓過氧化物酶檢測試劑盒 紅色熒光

簡要概述

Amplite 熒光法髓過氧化物酶檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的葡萄糖檢測的試劑盒，髓過氧化物酶(MPO)是一類具有過氧化物酶活性的綠色血紅素蛋白，大量存在于中性粒細胞和單核細胞中。它可以催化來自細胞毒素酸或者其他中間產物的雙氧水或者鹵化物反應，在氧依賴性殺死腫瘤細胞和微生物過程扮演著重要的角色。MPO的缺乏癥是一種遺傳性的酶缺乏，誘發免疫缺陷。因此治療MPO的抑制劑具有很大的發展前景。Amplite髓過氧化物酶檢測試劑盒能提供一種快速靈敏的檢測方法來測定溶解狀態或者細胞裂解液中的MPO。本試劑盒可以用于96或384微孔板分析，并且無需任何分步驟，就可以輕易地實現自動化。這個試劑盒使用我們的Amplite Red底物使其成為雙記錄模式。紅色的熒光信號很容易的通過熒光酶標儀（540／590nm）檢測到或者被吸收酶標儀（576nm）檢測到。通過Amplite 熒光髓過氧化物酶檢測試劑盒在100 ul檢測體積中能檢測到5ng／ml的髓過氧化物酶。本試劑盒可以自動的高通量篩選MPO的抑制劑。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的Amplite 熒光法髓過氧化物酶檢測試劑盒。

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產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

1.MPO標準品或測試樣品（50μL）
2.添加MPO工作溶液（50μL）
3.在室溫下孵育30-60分鐘
4.在Ex / Em = 540/590 nm處讀取熒光強度（截止570 nm）

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環。
1.1 Amplite 紅色儲備液（250X）：
將40μLDMSO（組分E）加入到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中。應立即使用原液。注意：在硫醇如二硫蘇糖醇（DTT）存在下，Amplite Red底物不穩定。反應中DTT的濃度應不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩定。因此，反應應在pH7-8下進行。推薦使用所提供的測定緩沖液，pH7.4。

1.2 H2O2儲備溶液（500X，10 mM）：
將10μL的3％H₂O₂（0.88M，組分C）加入870μL的測定緩沖液（組分B）中。注意：稀釋的H₂O₂溶液不穩定。應丟棄未使用的部分。

1.3 髓過氧化物酶（MPO）標準溶液（200 mU / mL）：
將50μL測定緩沖液（組分B）加入到髓過氧化物酶標準品（組分D）的小瓶中。注意：一個小瓶含有約5 - 10 mU的髓過氧化物酶。

2. HRP庫存解決方案（50X）：
將1mL測定緩沖液（組分B）加入到辣根過氧化物酶（組分C）的小瓶中。

3.葡萄糖氧化酶標準溶液（100 U / mL）：
將1mL測定緩沖液加入葡萄糖氧化酶小瓶（組分D）中。

4.葡萄糖原液（10X）：
將5mL測定緩沖液加入葡萄糖小瓶（組分F）中。

2.標準溶液

MPO標準
將20μL200mU / mL MPO標準溶液加入380μL測定緩沖液（組分B）中，得到10 mU / mL MPO標準溶液（MPO7）。 取10 mU / mL MPO標準溶液進行1：3連續稀釋，得到剩余的系列稀釋MPO標準品（MPO6 - MPO1）。

3.工作溶液

將20μLDelterite 紅色儲備液（250X）和10μLH2O2（500X）加入5mL測定緩沖液（組分B）中，使總體積為5.03mL MPO工作溶液。 避光。

樣品分析

表1. 96孔固體黑色微孔板中MPO標準品和測試樣品的布局。 MPO =髓過氧化物酶標準品（MPO1-MPO7,0.01至10mU / mL）; BL =空白對照; TS =測試樣品。

表2.每個孔的試劑組成。 注意，由于Amplite Red底物（非熒光產物）的過度氧化，高濃度的MPO可能導致熒光信號降低。

1.根據表1和2中提供的布局制備髓過氧化物酶標準品（MPO），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25μL試劑代替50μL。

2.向髓過氧化物酶標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50μLMPO工作溶液，使總MPO測定體積為100μL/孔。 對于384孔板，在每個孔中加入25μLMPO工作溶液，總體積為50μL/孔。

3.在室溫下孵育反應30至60分鐘，避光。

4.用熒光板讀數器在激發= 530-570nm，發射= 590-600nm（Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）監測熒光強度。 注意：也可以將板的內容物轉移到白色透明底板上，并用吸光度酶標儀在576±5nm的波長下讀數。 與熒光讀數相比，吸收檢測具有更低的靈敏度。

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